▶ 服务介绍

       蛋白磷酸化检测的核心原理是基于特异性识别磷酸化位点的抗体，通过抗体与磷酸化蛋白的靶向结合实现定性或定量分析。磷酸化蛋白由氨基酸（如丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸）与磷酸基团结合形成，其状态直接关联细胞信号传导、基因表达调控等关键生物学功能。检测技术需同时区分磷酸化与非磷酸化状态，因此抗体的特异性（如单克隆或多克隆抗体）是原理实现的关键。

▶ 实验步骤

免疫印迹法（WB）：定性与半定量的金标准
原理：通过SDS-PAGE分离蛋白质后转移至膜（PVDF/NC膜），利用磷酸化特异性抗体结合目标蛋白，经化学发光或荧光信号读取结果。
灵敏度：依赖抗体特异性，荧光偶联抗体可实现多蛋白同时检测；
定量能力：通过条带密度分析获得半定量数据，需结合总蛋白与管家基因作为内参；
注意事项：需设置阴/阳性对照（如calyculin A处理组作为阳性对照），避免脱脂牛奶封闭（含磷酸化酪蛋白干扰）。
免疫组化法：组织水平的定位分析
应用场景：在组织切片中可视化磷酸化蛋白的分布与表达量，适用于病理样本的原位检测；
技术特点：通过抗体染色与显微镜观察，可直观呈现磷酸化蛋白在细胞或组织中的空间定位。