▶ 服务介绍

       蛋白泛素化是通过E1（泛素激活酶）、E2（泛素转移酶）和E3（泛素连接酶）的级联催化，将泛素分子连接到靶蛋白的特定氨基酸残基（如赖氨酸）上的后翻译修饰过程，其核心功能是调控蛋白质的稳定性、定位及功能。检测技术基于对泛素化修饰状态（存在、程度、位点）的直接或间接分析，主要分为免疫检测、质谱分析、酶活性关联检测及活细胞动态监测四大类，各类方法在特异性、灵敏度和适用场景上各具特点。

▶ 实验方法

免疫印迹法（Western Blot, WB）
原理：通过SDS-PAGE分离蛋白样品，转移至膜后用泛素特异性抗体（如抗泛素抗体或靶蛋白-泛素融合抗体）结合泛素化修饰部分，再经二抗标记和化学发光/荧光检测信号强度，反映泛素化水平。
应用场景：快速验证泛素化条带，适合大量样品的初步筛选。

免疫组化（IHC）
原理：对组织切片或细胞进行固定后，用泛素抗体与泛素化蛋白结合，通过酶促显色反应（如DAB染色）可视化泛素化蛋白在细胞或组织中的定位及分布。
优势：可保留样本的空间结构信息，适用于临床病理样本分析。

免疫沉淀（IP）
原理：利用特异性抗体（如靶蛋白抗体）沉淀目标蛋白及其泛素化形式，结合WB或质谱分析泛素化状态，提高低丰度泛素化蛋白的检测灵敏度。